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哈佛醫(yī)學院Y. Shrike Zhang教授課題組 Adv. Mater.: 脫細胞基質(zhì)生物墨水的快速體積生物打印
2024-01-25  來源:高分子科技

  基于脫細胞基質(zhì)(dECM)的水凝膠廣泛應(yīng)用于增材生物制造技術(shù)。 dECM 的細胞外基質(zhì)成分和生長因子在細胞粘附、生長和分化中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。然而,較差的機械性能和打印性仍然是dECM 材料的主要限制。為發(fā)揮dECM材料的優(yōu)勢,哈佛醫(yī)學院Y. Shrike Zhang教授團隊將其與體積增材制造(Volumetric Additive ManufacturingVAM)緊密結(jié)合起來,開發(fā)了基于未修飾的天然的豬心dECM (h-dECM) 和豬半月板dECM (Ms-dECM) 的生物墨水體系。通過VAM旋轉(zhuǎn)投影動態(tài)變化的光圖案實現(xiàn)的三維物體的快速光聚合,從而將對生物打印水凝膠結(jié)構(gòu)的機械強度要求與打印性分開,允許使用低濃度的 dECM 生物墨水實現(xiàn)復(fù)雜形狀結(jié)構(gòu)的快速打印。作為示例應(yīng)用,使用裝載大鼠心肌細胞 (rCMs h-dECM體積打印心臟組織,顯示出較好的細胞增殖、展開和擴散, 并進一步使用裝載人誘導(dǎo)多能干細胞衍生的心肌細胞 hiPSC-CMs h-dECM生物墨水,展示了肌節(jié)結(jié)構(gòu)的生成和同步收縮。同時使用裝載人間充質(zhì)干細胞 (hMSCs 的 Ms-dECM生物墨水進行體積打印的半月板結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)出較好的軟骨分化結(jié)果。這項研究為VAM進一步擴展了生物墨水庫,并擴大了dECM在組織工程和再生醫(yī)學中的應(yīng)用。


1. h-dECM Ms-dECM 生物墨水材料的制備和打印機理


  研究人員從豬的左心室和豬的半月板中分別提取了h-dECMMs-dECM兩種材料 (1);趦煞NdECM中富含的絡(luò)氨酸基團能與Ru/SPS 光引發(fā)劑在一定條件下發(fā)生光聚合反應(yīng)的機理,研究人員用不同濃度dECM材料與Ru/SPS按照一定比例混合,測試并優(yōu)化了其光聚合效率和打印性。同時研究人員發(fā)現(xiàn)h-dECM Ms-dECM都可以在1%的低濃度條件下實現(xiàn)VAM復(fù)雜結(jié)構(gòu)的快速打印(圖2)。


2. h-dECM he Ms-dECM VAM打印性測試和打印結(jié)果展示


  為了展示dECM生物墨水的生物打印性和細胞兼容性,研究人員將NIH/3T3 成纖維細胞與兩種dECM分別混合并進行VAM體積打印, 并發(fā)現(xiàn)在一定的細胞密度內(nèi)并不會顯著影響其打印性。同時,由于dECM提供的良好的微環(huán)境,細胞在共培養(yǎng)的14天里展現(xiàn)了很好的細胞增殖、展開和擴散。這個現(xiàn)象進一步在混有rCMsh-dECM生物墨水打印的心臟結(jié)構(gòu)中得到了驗證。為了進一步展示dECM-VAM打印體系的優(yōu)勢,研究人員用混有hiPSC-CMsh-dECM生物墨水進行打印,并在第五天觀察到嵌入的hiPSC-CMs細胞開始節(jié)律性的跳動,同時第十天的免疫染色也驗證了相關(guān)肌節(jié)結(jié)構(gòu)的生成(圖3)。


3. dECM-VAM生物打印測試和h-dECM打印結(jié)構(gòu)的部分功能化展示


  最后研究人員也將hMSCs Ms-dECM混合并通過VAM打印了半月板結(jié)構(gòu)。在分化前的14天體外培養(yǎng)中,hMSCs展現(xiàn)了很好的細胞活性,并充分增值,展開和擴散。隨后在三周的軟骨分化周期內(nèi),細胞也持續(xù)表達相關(guān)的軟骨分化基因,證明了該材料體系能提供較好的微環(huán)境,讓hMSCs進行相關(guān)分化活動。并且在五周的體外培養(yǎng)結(jié)束后,半月板結(jié)構(gòu)并未發(fā)生明顯變化,展現(xiàn)了其較好的穩(wěn)定性。由于天然半月板的有限血管化導(dǎo)致自我再生能力差,這種 VAM 生物打印半月板為半月板移植等相關(guān)生物醫(yī)學應(yīng)用提供了潛在的可能。


4 Ms-dECM-VAM打印的半月板部分功能化展示


  總結(jié):研究人員成功開發(fā)了基于VAM的天然的未經(jīng)修飾的 dECM(生物)墨水,并證明了通過 VAM快速制造基于水凝膠的組織結(jié)構(gòu)的潛力。通過優(yōu)化配方,實現(xiàn)了低濃度h-dECM 和 Ms-dECM 復(fù)雜結(jié)構(gòu)的打印, 并維持較好的打印保真度。更進一步地,基于 h-dECM 和 Ms-dECM 良好的細胞相容性,對體積生物打印的心臟和半月板結(jié)構(gòu)進行了功能化實驗,展示了混合在 h-dECM 打印結(jié)構(gòu)中或在其表面上 rCM 和 hiPSC-CM 的擴散和收縮行為,以及嵌入在 Ms-dECM 半月板結(jié)構(gòu)中的hMSC 的軟骨分化。這項工作進一步擴展了VAM的生物墨水庫,同時拓寬了基于 dECM 的生物材料在生物醫(yī)學中的應(yīng)用。


  相關(guān)工作以“Rapid Volumetric Bioprinting of Decellularized Extracellular Matrix Bioinks ”為題發(fā)表在Advanced Materials上。通訊作者為哈佛大學醫(yī)學院Y. Shrike Zhang教授。文章第一作者為哈佛醫(yī)學院連黎明(現(xiàn)為佐治亞理工大學/埃默里大學在讀博士)。論文共同第一作者為廣州醫(yī)科大學謝茂彬教授(香港理工大學博士,哈佛大學博士后(Y. Shrike Zhang教授課題組),廣東省杰青),哈佛大學醫(yī)學院/四川大學華西醫(yī)院聯(lián)合培養(yǎng)博士羅澤宇(現(xiàn)四川大學華西醫(yī)院副研究員)以及哈佛大學醫(yī)學院研究生張振銳。其他作者還包括哈佛醫(yī)學院Sushila Maharjan, Xuan Mu, Carlos Ezio Garciamendez-Mijares, Xiao Kuang, Guosheng Tang, Di Wang, Jie Guo, Federico Zertuche González, Victoria Manjarrez, Ling Cai, Xuan Mei,以及塔夫茨大學Jugal Sahoo、Gang LiDavid Kaplan教授。


  原文鏈接https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/adma.202304846


作者簡介


  謝茂彬 教授簡介:謝茂彬,博士,博士生導(dǎo)師,廣州醫(yī)科大學生物醫(yī)學工程學院教授,廣東省珠江人才計劃青年拔尖人才,廣東省杰青。2016年博士畢業(yè)于香港理工大學,2019-2021年美國哈佛大學醫(yī)學院博士后。長期從事3D生物打印和生物材料領(lǐng)域研究。發(fā)表學術(shù)論文33篇,其中以第一/通訊作者身份在Sci. Transl. Med.Nat. Commun.、STAR Protoc.Adv. Mater.、Adv. Funct. Mater、Biomaterials等期刊發(fā)表學術(shù)論文30余篇。申請發(fā)明專利15件,其中PCT專利2件,已授權(quán)6件。目前是中國生物醫(yī)學工程學會會員、廣東省生物醫(yī)學工程學會生物醫(yī)用材料與臨床應(yīng)用分會委員。同時擔任Adv. SciACS Nano、Small、Appl. Mater. TodayNanoscale等國際著名學術(shù)期刊審稿人。


  羅澤宇 副研究員簡介: 羅澤宇,四川大學華西臨床醫(yī)學院&哈佛大學聯(lián)合培養(yǎng)博士,分別師從周宗科教授和Y. Shrike Zhang教授。研究內(nèi)容主要涉及3D生物打印、微流控技術(shù)、骨與軟組織工程等研究領(lǐng)域。截止目前,在Adv. Mater.、PNASNat. Commun.、MatterAdv. Function. Mater.、Small、Adv. Health. Mater.等國際權(quán)威期刊上發(fā)表三大檢索收錄論文40余篇。論文被引用超過1000余次。2篇文章入選全球Top 1% ESI高被引論文。主持國家自然科學基金、博新計劃等高水平基金項目。

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(責任編輯:xu)
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